LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit

ANGEBOT ANFORDERN

Dieses Kit ist für die Anwendung des Monozyten-Aktivierungstest (MAT) zum Nachweis von Pyrogenen bestimmt. Pyrogen ist ein Sammelbegriff für Substanzen, die bei Tieren einen Anstieg der Körpertemperatur verursachen. Parenterale Medikamente und medizinische Geräte, die mit Blut in Berührung kommen, müssen auf den Gehalt von Pyrogenen getestet werden. Der erste entwickelte Test zum Nachweis einer weiten Bandbreite von Pyrogenen war der Kaninchen-Pyrogentest (RPT). Beim RPT werden den Kaninchen die zu untersuchenden Proben intravenös verabreicht und die Körpertemperatur überwacht. Da der RPT Probleme mit der Reproduzierbarkeit, der Genauigkeit und den Kosten hat, wurde das Limulus-Amebozyten-Lysat-Reagenz (LAL) als Ersatz verwendet. Allerdings können mit dem LAL-Reagenz keine Pyrogene nachgewiesen werden, die keine Endotoxine sind, und der RPT wird demenstprechend weiterhin verwendet, wenn das LAL-Reagenz nicht geeignet ist.

MAT ist ein in vitro Pyrogentest, welcher als Alternative zum RPT entwickelt wurde und dieser kann sowohl Endotoxine als auch Nicht-Endotoxin-Pyrogene nachweisen.

EIGENSCHAFTEN

• Assay mit Reporter-NOMO-1- Zellen
• Schnell-Test (5 Stunden)
• Handlicher Reporter-Assay
• Schnelle Detektion (nur das Hinzufügen des Substrats ist nach der Inkubation zur Platte notwendig)
• Stabile Reporter-Zelllinie
• Zelllinie produziert stabil das Reportergen
• Hohe Reproduzierbarkeit mit weniger Lot-zu-Lot Variation
• Beständige Lieferung von der “Master”-Zellbank

KIT KOMPONENTEN

* Beide LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Zellen und Reganzien Set sind zur Anwendung des Assays notwendig.

ASSAY PRINCIPLE

MAT wird zum Nachweis von Pyrogenen verwendet, die in menschlichen monozytären Zellen die Freisetzung von Entzündungszytokinen aktivieren.

Koventioneller MAT

Beim konventionellen MAT werden PBMC (mononukleare Zellen des peripheren Blutes) mit der Probe in Mikrotiterplatten kultiviert. Bei der Anwesenheit von Pyrogenen setzen die monozytischen Zellen Zytokine frei, welche mittels der ELISA-Methode detektiert werden können.

LumiMAT™

LumiMAT™ verwendet die monozytische Zellinie NOMO-1, in welcher das Luciferase reporter Gen inseriert wurde. In Anwesenheit von Pyrogenen wird die Expression der Luciferase als Reaktion auf die NF-kB- Aktivierung initiert. Nach der Inkubation wird das entsprechend hinzugefügte Substrat durch die produzierte Luciferase gespalten, woraufhin Lumineszenz erzeugt wird und mithilfe eines Lumineszenz-Mirkotiterplatten-Lesegeräts zur Bestimmung von Pyrogenen in der Probe verwendet werden kann.

ASSAY ABLAUF

Zuerst werden die Probe oder das standisierte Endotoxin (für Standardkurve) in die Mikrotiterplatte vorgelegt, woraufhin die Reporterzellen hinzugefügt und eine Inkubation von 3 Stunden gestartet wird. Nach der Inkubatoinszeit wird das lumeniszierende Substrat hingezügft und die Lumineszenz mithilfe eines Plattengeräts gemessen.  Im Vergleich zum ELISA ist dies ein einfacher Ein-Platten-Assay, der Schwankungen zwischen den Tests unterdrückt. Darüber hinaus können die Ergebnisse in etwa 5 Stunden erzielt werden, was deutlich kürzer ist als die 1,5 Tage, die die herkömmliche Methode benötigt.