LumiMAT™ Kit para la detección de pirógenos

Solicitar cotización

Este kit es para el test de activación de monocitos (MAT) para detectar pirógenos. El término pirógeno es un concepto genérico que designa las sustancias que provocan un aumento de la temperatura corporal en los animales. Los medicamentos parenterales y los dispositivos médicos que entran en contacto con la sangre deben estar libres de pirógenos. La primera prueba desarrollada para detectar una amplia gama de pirógenos fue el test de pirógenos en conejos (RPT). En el RPT, las muestras a analizar se administran por vía intravenosa a conejos y se controla la temperatura corporal. Dado que el RPT tiene problemas de reproducibilidad, precisión y costo, se ha utilizado ampliamente como sustituto el reactivo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL). Sin embargo, el reactivo de LAL no puede detectar pirógenos no endotoxínicos, y el RPT se sigue utilizando en caso de que el reactivo de LAL no sea apropiado.

El MAT es un test de pirógenos in vitro desarrollado como alternativa al RPT y puede detectar no sólo endotoxinas sino también pirógenos no endotoxínicos.

CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES

• Ensayo con células reporteras NOMO-1
• Ensayo rápido (5 horas)
• Ensayo reportero cómodo
• Sólo hay que añadir sustrato luminiscente a la placa después de la incubación
• Línea celular reportera estable
• Líneas celulares que expresan genes reporteros de forma estable
• Alta reproducibilidad con menor variación entre lotes.
• Suministro estable desde el banco de células maestro

COMPONENTES DEL KIT

*Tanto el LumiMAT™ Kit de detección de pirógenos - células, como el conjunto de reactivos son necesarios para un ensayo.

PRINCIPIO DEL ENSAYO

MAT se utiliza para detectar pirógenos que activan las células monocíticas humanas para liberar citoquinas inflamatorias.

MAT convencional 

Cultivar PBMC (células mononucleares de sangre periférica) y muestras para analizar en placa de micropocillos. Las citocinas liberadas por las células monocíticas por exposición a pirógenos se miden mediante ELISA para detectar pirógenos en las muestras.

LumiMAT™

LumiMAT™ utiliza una línea celular monocítica NOMO-1 en la que se introduce un gen reportero de luciferasa para expresar la proteína luciferasa en respuesta a las señales NF-kB activadas por la exposición a pirógenos. Dado que la luciferasa expresada genera luminiscencia al reaccionar con el sustrato, la luminiscencia puede detectarse mediante un lector de microplacas de luminiscencia para detectar pirógenos en las muestras.

FLUJO DEL ANÁLISIS

Añada las muestras a analizar o la endotoxina estándar en la microplaca, añada las células reporteras e incube durante 3 horas; tras la incubación, añada el sustrato luminiscente para medir la luminiscencia con un lector de placas. En comparación con ELISA, se trata de un ensayo simple de una única placa que suprime las variaciones entre pruebas. Además, los resultados pueden obtenerse en aproximadamente 5 horas, lo que es significativamente más breve que los 1,5 días que requiere el método convencional.