Ensayo LAL, Glucano, y Linea de Productos PYROSTAR
Ensayo LAL
El ensayo LAL es el método más sensible para la detección de endotoxinas bacterianas actualmente aprobado por la FDA. La primera metodología utilizada para determinar los resultados de la prueba LAL fue la formación de un coágulo de gel en el fondo de un tubo de reacción de vidrio. También se ha observado que la solución de la prueba se vuelve turbia antes de la formación del gel. El tiempo requerido para producir un nivel específico de turbidez es inversamente proporcional a la cantidad de endotoxinas en la muestra.
Un instrumento fotométrico como el toxinómetro (Fujifilm Wako Pure Chemical Corporation) se utiliza para medir la velocidad de cambio en la turbidez. Este procedimiento de medición cuantitativa se conoce como el ensayo cinético turbidimétrico (KTA).
Mediante la utilización de estas propiedades, Fujifilm Wako Chemicals U.S.A. Corporation. ha desarrollado una prueba única de endotoxina LAL que puede utilizarse ya sea como un ensayo turbidimétrico cuantitativo o como una prueba cualitativa de gel.
PYROSTAR™ ES-F/PLATE
El PYROSTAR™ ES-F/Plate está diseñado para la detección cuantitativa de endotoxinas por ensayo cinético turbidimétrico utilizando un lector de microplacas. El rango cuantitativo para esta prueba cinético turbidimétrica (KTA) es de 0.01 a 10 UE/ml.
El lector de microplacas se utiliza en vez del toxinómetro para obtener resultados KTA de PYROSTAR™ ES-F Multiproductos.
PYROSTAR™ ES-F
El PYROSTAR™ ES-F está diseñado para detectar cualitativamente las endotoxinas por coágulos de gel o cuantitativamente por medio de métodos cinético turbidimétricos. El rango cuantitativo para el ensayo cinético turbidimétrico (KTA) se basa en la sensibilidad del lisado de los coágulos de gel marcada en la etiqueta; consulte la tabla siguiente.
| Sensibilidad en la etiqueta del lisado de los coágulos de gel (UE/ml) | Rango cuantitativo KTA (UE/ml) |
| 0.015 | 0.001 a 10 |
| 0.03 a 0.25 | 0.01 a 10 |
La especificidad de LAL no es absoluta. Se ha reportado que LAL reacciona no sólo con endotoxina, sino también con β-1, 3-glucano. Aunque el sistema de cascada activado por β-1 ,3-glucano ha demostrado ser diferente al que activa la endotoxina, el resultado final, la formación de coágulos de gel, es indistinguible.
La activación de LAL por glucano en una muestra puede prevenirse mediante la adición de una gran cantidad de curdlan carboximetilado (CMC) a LAL. La presencia de grandes cantidades de glucano no interfiere con la cuantificación de endotoxinas. Wako fue el primero que hizo uso de estos hallazgos mediante el desarrollo de un ES-buffer que contiene altas concentraciones de CMC. Cuando se utiliza el ES- buffer para reconstituir LAL, el reactivo LAL se convierte en específico para la endotoxina. El PYROSTAR™ ES-F es una nueva preparación de LAL en la que el CM-curdlan se co-liofiliza con LAL. Reconstituir los viales de prueba PYROSTAR™ ES-F da como resultado un reactivo LAL específico para la endotoxina para la determinación particular de endotoxinas bacterianas Gram-negativas sin la interferencia de la presencia de glucanos en la muestra.
Ventajas de usar PYROSTAR™ ES-F:
- Un reactivo LAL específico para endotoxina
- No reacciona con glucano
- Detección cualitativa de endotoxinas por coágulos de gel o detección cuantitativa por métodos cinético turbidimétricos.